很多人第一次接觸肉源性 DNA 檢測儀，不知道從哪里下手。其實(shí)真假肉檢測流程非常標(biāo)準(zhǔn)化，只要按步驟操作，就能快速出具準(zhǔn)確結(jié)果。本文以實(shí)時熒光定量 PCR 真假肉檢測儀為例，完整演示一遍檢測全過程。

　一、檢測前準(zhǔn)備

　　儀器：四通道 48 孔 / 16 孔熒光定量 PCR 儀

　　耗材：0.2ml 單管或八聯(lián)管、離心管、槍頭

　　試劑：動物源性特異性引物、探針、PCR 預(yù)混液

　　樣品：豬肉、牛肉、羊肉、驢肉、馬肉、雞肉、鴨肉等待測肉類

　　其他：蒸餾水、離心機(jī)、均質(zhì)器

二、樣品處理與 DNA 提取

　　取適量肉類樣品，剪碎后進(jìn)行均質(zhì)化處理

　　按照試劑盒說明書提取總 DNA

　　將提取后的 DNA 置于冰上備用，避免反復(fù)凍融

三、配制 PCR 反應(yīng)體系

　　在反應(yīng)管中依次加入：

　　PCR 緩沖液

　　特異性引物

　　熒光探針

　　樣品 DNA

　　補(bǔ)足水至總體積(15–100μL 均可)

　　蓋緊管蓋，短暫離心，去除氣泡

　　將反應(yīng)管放入儀器樣品槽

四、儀器設(shè)置與運(yùn)行程序

　　開機(jī)，進(jìn)入 Android 系統(tǒng)或連接 Windows 電腦

　　選擇檢測項(xiàng)目：豬 / 牛 / 羊 / 馬 / 驢 / 雞 / 鴨源性成分

　　設(shè)置溫控程序：

　　預(yù)變性

　　循環(huán)擴(kuò)增(變性 — 退火 — 延伸)

　　熔解曲線(如需)

　　選擇對應(yīng)熒光通道，設(shè)置樣品信息

　　點(diǎn)擊運(yùn)行，儀器自動開始擴(kuò)增與熒光采集

五、實(shí)時監(jiān)測與結(jié)果判讀

　　儀器在擴(kuò)增過程中實(shí)時采集熒光信號，自動生成擴(kuò)增曲線。

　　出現(xiàn)典型 S 型擴(kuò)增曲線：判為陽性，含有該種動物源性成分

　　無明顯擴(kuò)增：判為陰性

　　軟件自動計(jì)算 Ct 值、基線、閾值，無需人工手動調(diào)整，保證結(jié)果客觀。

六、數(shù)據(jù)導(dǎo)出與報(bào)告生成

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，查看擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線、熔解曲線

　　支持分組分析，最多可分 6 組獨(dú)立統(tǒng)計(jì)

　　一鍵導(dǎo)出數(shù)據(jù)：XLS、CSV、DOCX、PDF 格式

　　自動生成檢測報(bào)告，支持 16 孔分項(xiàng)目打印

　　可存檔、可追溯，滿足市場監(jiān)管、食安檢查要求

七、儀器維護(hù)要點(diǎn)

　　使用后清潔樣品槽，避免液體滲漏

　　儀器采用 LED 固態(tài)光源，終身免維護(hù)

　　光電倍增管靈敏度高，避免強(qiáng)光直射

　　長期不用放置在干燥環(huán)境，儲存溫度 - 20~55℃

　　整體流程簡單規(guī)范，即使不是專業(yè)分子生物學(xué)人員，經(jīng)過簡單培訓(xùn)也能熟練操作。